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Hoechst 33342与小沟中的DNA腺嘌呤-胸腺嘧啶富集区结合。在与DNA结合时，荧光大大增加。本品为粉末状，用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33342工作浓度为0.5～10μg/ml。如配置好的溶液产品，可选购Hoechst 33342染液（1mg/ml；货号：LA00125）或者Hoechst 33342染液(即用型，货号：LA00161）。

Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。


CAS号：23491-52-3
分子式：C27H28N6O.3(HCl).3(H2O)
纯度：＞98%
外观：黄色或者绿色粉末
溶解性：溶于水(>20mg/ml)
激发波长（EX）：346nm
发射波长（EM）：460nm
保存：-20℃，避光防潮密闭干燥


以下方法仅供参考。

• 配制母液
  Hoechst 33342溶于水，溶解度可达20mg/ml。因此可用无菌超纯水配制成1～5mg/ml的储存液于4℃避光保存。使用时用PBS或者其他合适缓冲液将其稀释成0.5～10μg/ml工作液。
  注：Hoechst 33342溶于PBS或者其他缓冲液时会有沉淀产生，因此不能用上述缓冲液进行储存液的配制。
  
• 用PBS或合适的缓冲液制备10～50μM Hoechst33342染色液。
  
• 固定的细胞或组织染色：
  对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
  
  • 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。
    
  • 对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3～5分钟。
    
  • 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2～3次，每次3～5分钟。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。
• 活细胞或组织染色：
  
  • 细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100μL染色液。
    
  • 在37℃培养细胞10～20分钟。
    
  • 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

以下细胞实验方法仅供参考。

• 标记核DNA，在H2O中稀释Hoechst储备溶液1:100用于标记。
  
• Aspirate细胞培养基上的细胞生长在盖玻片上。用PBS+冲洗细胞三次。
  
• 在室温下将Hoechst标记溶液中的细胞（从步骤1）孵育10～30分钟。
  
• Aspirate标记溶液。在PBS+中冲洗细胞三次。
  
• 安装盖玻片。
  
• 对Hoechst 33342的细胞进行成像（波长为353nm，αEm为483nm）。

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